实验室尹文兵研究团队建立基于单细胞定量表征的丝状真菌启动子高通量筛选方法及应用

图1. 丝状真菌启动子的高通量筛选及定量表征流程

      为评估新建高通量筛选方法的精确性，该研究随机选择不同强度水平的启动子，利用qRT-PCR对其负责的SfGFP基因表达量进行测定；通过共聚焦显微镜观察荧光强度；用于激活沉默的免疫抑制剂neosartoricin生物合成基因簇，并计算neosartoricin产量，以反映启动子表达水平。结果表明，利用以上三种手段表征的启动子强度水平均与启动子文库一致，证明新建的基于单细胞水平表征的真菌启动子高通量筛选方法能够可靠、准确地表征启动子强度。 

      此外，该研究还利用筛选出的两个强启动子P_zipA和P_sltA，替换烟曲霉非核糖体多肽合成酶基因Afpes1的原始启动子，成功激活该沉默基因，并通过天然产物分离鉴定出两个新型环四肽化合物，命名为fumiganins A和B。结合前人对Afpes1基因的研究进展，该研究推测其产物fumiganins可能与烟曲霉氧化胁迫响应机制及毒力作用相关。 

     中国科学院微生物研究所博士生魏鹏霖、特别研究助理范洁以及毕业硕士生余婧雯为该文章的共同第一作者，尹文兵研究员为通讯作者。这项工作得到了国家重点研发计划、国家自然科学基金、中国科学院战略生物资源服务网络计划生物资源衍生库项目、中国科学院从0到1原始创新项目及博士后科学基金项目的支持。